ABI7900熒光定量PCR儀

一、ABI7900熒光定量PCR儀是繼7700、5700型熒光定量PCR儀之后，ABI公司推出的高通量實時熒光定量PCR系統。它是兼容96孔板和384孔板的熒光定量PCR儀，也是可選手工進樣和自動進樣的熒光定量PCR儀。7900HT型熒光定量PCR儀可滿足從中通量到高通量實驗的需求。  

二、ABI7900熒光定量PCR儀主要特點:  

（1）高效平臺-7900HT系統是為支持高通量而構建的，光學系統經優化以適用于384孔板熒光信號的激活和實時檢測。  

（2）結果可靠-7900HT系統采用了與7700、5700相同的定量原理，利用Ct值（Ct定義為在基線上方產生可檢測到的統計學上顯著的熒光發射的這一PCR循環）和起始拷貝數的對應關系，通過外標準曲線精確計算未知樣品的起始拷貝數。  

（3）高度重現性-7900HT系統的熒光檢測發生在PCR對數期的起始，因此反應管中各組分沒有任何限制反應因素，從而確保檢測結果都是精確并能重復的。  

（4）先進的熒光檢測技術-RISM®7900HT熒光定量PCR系統在不降低速度、分辨率的情況下有效提高了產率，這是基于先進的熒光檢測技術：一束激光掃描并激活384個孔的每一個孔里的熒光染料，熒光信號通過光柵分光，經過分離的多色熒光同時到達CCD攝像機，實現多色熒光同時檢測。  

（5）自動進樣裝置-7900HT系統配備有自動化配件可取得高效率。自動化裝置可容納84塊384孔板，機械手臂可按一定順序將待測樣品板運送至主機內，配備的條形碼閱讀器（Barcodereader）可自動識別進入主機的樣品板編號，使你在任何時間可以在樣品行列中插入或替代樣品板。  

（6）多樣的化學試劑-7900HT型熒光定量PCR儀上可使用的化學試劑包括TaqMan熒光探針法和SYBRGreen熒光染料法。TaqMan探針法具有高度的靈敏度和特異性，適用于實時定量的多重反應或單核苷酸多態性分析（SNP）。SYBRGreen染料應用于目標鑒定（篩選測定）或者在只需用少數幾個反應的測定中為理想。  

（7）有效防污染-7900HT系統在PCR全過程中使用專門設計的和始終密閉的樣品管。在加入樣品和試劑后這些管子便立即封閉并在擴增和檢測過程中保持這種狀態，這樣就可以大大地減少污染的機會；此外，7900HT系統不存在PCR后處理，有效防止擴增產物對實驗環境的污染而造成的假陽性。  

（8）多種定量方法-ABIPRISM®7900HT序列檢測系統軟件為基因表達提供一種定量化方法。定量是從一個標準曲線上直接測定目標（基因）的量。相對定量方法是通過與標定樣品相比較而計算未知樣品的量，不需要標準曲線。  

三、原理介紹：  

1.定量，為了測定未知樣品中的目標（基因）的數量，7900HT系統可用來測定樣品的CT，然后用一條標準曲線來測定起始的拷貝數。在標準曲線的繪制中，7900HT系統軟件首先用已知的起始拷貝數的幾種稀釋度計算它們的CT值。接著，軟件使用測得的CT值對應于起始拷貝數的對數值作圖。至少在五個數量級范圍中兩者呈線性關系。  

2.相對定量，對于基因表達研究來說，相對定量是理想的方法。這里不是應用標準曲線而是相對于標定樣品計算表達水平。用一個內源對照來標定樣品的量。這一方法與7900HT系統在一個多重反應中能同時對目標和內源對照進行定量測定的能力相結合，可實現高效、高通量的基因表達研究。  

3.有效的SNP檢測手段，除實時定量測定以外，7900HT系統包括對于已知的單一核苷酸多態性（SNPS）作大規模篩選的軟件。在一對等位基因系統中，用對應于兩個等位基因的兩個TaqMan探針在同一個試管中做多重PCR反應。反應終止時所產生的熒光用7900HT系統進行測定，實驗結果通過分析軟件迅速取得。  

四、儀器規格和技術指標:  

（1）系統組成，7900HT熒光定量PCR儀－384孔或96孔可更換式半導體控溫PCR儀，488nm長壽氬離子激光器，X,Y雙軸同步熒光掃描頭。  

（2）光柵和CCD檢測裝置，自動進樣裝置，DELLGX270電腦，Windows2000操作系統，儀器控制，數據采集及結果分析軟件，PrimerExpress引物探針設計軟件。  

（3）大產率，實時定量檢測－5000樣品/天（標準模式），96樣品/35分鐘（快速模式），終點SNP分析－30000樣品/2.5小時。  

（4）裝機指標，以99.7%的置信度明確區分濃度差別兩倍（5000和10000拷貝）的樣品的定量結果試劑和消耗品。  

（5）完備的通用基本試劑盒和消耗品，十二萬種TaqmanGeneExpressionAssays人、大鼠、小鼠基因組基因表達分析試劑盒，二百萬種TaqmanValidatedSNPGenotypingAssays人、大鼠、小鼠基因組SNP檢測試劑盒。  

（6）Taqman低密度表達譜芯片，CustomAssays代客設計、合成引物探針服務。